蒼耳（Xanthiumsibiricum）為菊科（Compositae）蒼耳屬（XanthiumL.）植物，俗稱羊帶歸、狗耳朵草、疔瘡草、野茄子、粘粘葵、蒼子棵、卷耳、爵耳等[1]。廣泛分布于我國各地，目前均為野生狀態(tài)，適應(yīng)性強(qiáng)，可生長于各種環(huán)境下，尤其是荒野、路邊、田間地頭廣布，全國資源豐富[2-3]。蒼耳是傳統(tǒng)的藥用植物，其成熟的果實(shí)入藥，被稱為蒼耳子，可應(yīng)用于治療多種疾病[4-8]，已被中國藥典收錄。蒼耳子中富含油脂，蒼耳子油目前已被確認(rèn)為有一定的營養(yǎng)價(jià)值，還具有抗菌、抗病毒、消炎等作用，是潛在的食用油和保健食品開發(fā)資源[9]。

　　摘要：利用微波輔助技術(shù)提取黑龍江產(chǎn)蒼耳（Xanthiumsibiricum）莖中的總黃酮。結(jié)果表明，以乙酸乙酯提取，在微波功率為800W條件下處理2min，料液比為1∶15（g/mL），與傳統(tǒng)提取方法相比，該法提取時(shí)間短、提取效率高。黑龍江產(chǎn)的蒼耳莖中總黃酮含量較高。

　　關(guān)鍵詞：蒼耳（Xanthiumsibiricum）莖,微波輔助提取,總黃酮

　　蒼耳莖葉也具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，可被開發(fā)為牲畜飼料，有報(bào)道蒼耳莖葉作為添加劑飼喂生豬可提高豬肉品質(zhì)[10]。蒼耳全草也可入藥，治療痢疾、中耳炎、鼻炎、功能性子宮出血、濕疹、皮膚癌、瘙癢等[11-13]，蒼耳中目前已確認(rèn)含有多種化學(xué)成分，包括水溶性苷類、倍半萜內(nèi)酯類、揮發(fā)油類等[14，15]。黃酮類物質(zhì)廣泛存在于多種植物體內(nèi)，其分子結(jié)構(gòu)中存在兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子連結(jié)的基本結(jié)構(gòu)。黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗炎、降血糖、降膽固醇、調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤等多方面藥理作用[16-18]。蒼耳在黑龍江分布普遍、適應(yīng)性強(qiáng)、資源儲量大，目前尚未被充分利用。本研究根據(jù)相關(guān)研究成果[19，20]探討了微波輔助提取蒼耳莖中總黃酮方法。微波提取的基本原理是基于微波的穿透性，透入基質(zhì)內(nèi)部形成內(nèi)熱源，其加熱具有選擇性，可使細(xì)胞內(nèi)各細(xì)胞器升壓，從而使細(xì)胞壁破裂，使目標(biāo)成分從細(xì)胞中釋放出來并溶解于溶劑中[21]，以微波輔助提取蒼耳莖中總黃酮，提取效率高，操作簡便，能更準(zhǔn)確測定黑龍江蒼耳莖中總黃酮含量，對于黑龍江產(chǎn)蒼耳植株的綜合開發(fā)和利用具有重要的參考和借鑒意義。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　1.1.1蒼耳9月15日采摘于黑龍江省綏化市北林區(qū)郊區(qū)公路旁。

　　1.1.2儀器與試劑752型紫外-可見光分光光度計(jì)（北京普析儀器設(shè)備有限公司），HH4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司），101AS2型不銹鋼數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠），SY-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），美的EG823MF4-NR1型微波爐（美的微波電器制造有限公司）；蘆丁對照品（Rutin，Merck，中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

　　1.2方法

　　1.2.1蒼耳莖黃酮類化合物的提�、偕n耳莖的處理：采集來的蒼耳植株經(jīng)自然干燥后，去除果實(shí)、葉片、根部等，用剪刀將莖剪碎，組織搗碎機(jī)粉碎成粗粉；②蒼耳莖總黃酮的粗提�。簩⒎鬯楹玫纳n耳莖粉末1g置于100mL錐形瓶中，加入15mL乙酸乙酯，首先微波爐800W加熱2min，水浴蒸干乙酸乙酯，取出后加入相當(dāng)于15倍粉末質(zhì)量的60%乙醇，在85℃水浴的條件下進(jìn)行回流，再浸提25min。浸提完成之后過濾，收集浸提液，得到的就是蒼耳莖樣品總黃酮粗提取液，把每個(gè)樣品的粗黃酮液定容至50mL。取一定體積的粗黃酮液，經(jīng)水浴加熱濃縮后，于103℃下烘干至恒重，從而得到粗黃酮粉，計(jì)算粗黃酮粉的得率。作為對比，取蒼耳莖粗粉10g，以紗布包成小包，置于索氏提取器中，加入300mL60%乙醇，90℃水浴回流提取3h，過濾，收集濾液，定容至500mL，得粗黃酮提取液，取一定體積的粗黃酮提取液，進(jìn)行測定。

　　1.2.2蒼耳莖黃酮提取物的顏色反應(yīng)取0.010g蘆丁用60%的乙醇定容至100mL，連同粗黃酮液、粗黃酮粉進(jìn)行鹽酸鎂粉反應(yīng)的定性顏色反應(yīng)。分別取總黃酮粗提取液、總黃酮粗粉適量以乙醇配制的溶液和蘆丁液約1mL于試管中，加入少量鎂粉，再加3滴濃鹽酸，至沸水浴上加熱，觀察記錄現(xiàn)象。

　　1.2.3蒼耳莖總黃酮含量的測定根據(jù)黃酮類化合物與鋁鹽可以生成具有特征紅色的絡(luò)合物的性質(zhì)，首先以蘆丁為對照品，將待測樣品以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)樣品，在500nm處比色，測定樣品中總黃酮含量。精密稱取0.0140g的干燥至恒重的蘆丁對照品，然后在25mL容量瓶中加入適量去離子水，放置于超聲清洗儀超聲10min溶解，以去離子水定容。移取10mL至100mL容量瓶中，加水至刻度定容，即得0.056mg/mL蘆丁對照品溶液。精密量取蘆丁對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加水至6.0mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，混勻，靜置6min，加5%硝酸鋁溶液1mL，混勻，靜置6min，加4%氫氧化鈉溶液10mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)的試劑為參比，在500nm處測其吸光度，得吸光度與蘆丁濃度線性方程。

　　取1.2.1項(xiàng)中粗黃酮提取液25mL，精密量取10mL至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，作為待測液。精密量取6mL待測液置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，混勻，靜置6min，加5%硝酸鋁溶液1mL，混勻，靜置6min，加4%氫氧化鈉溶液10mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)的試劑為參比，在500nm處測其吸光度，并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算總黃酮得率。2結(jié)果與分析

　　2.1蒼耳莖總黃酮含量

　　2.1.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制作由圖1可以看出，在濃度為0.0112～0.1344mg/mL，蘆丁濃度與吸光度有較好的線性關(guān)系，吸光度（A）與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度（C，mg/mL）的回歸方程為：A=8.2988C+0.0015，r=0.9985。

　　2.1.2蒼耳莖總黃酮含量4個(gè)不同的蒼耳莖樣本，分別采用微波輔助萃取和溶劑回流提取蒼耳莖總黃酮，測定蒼耳莖中總黃酮含量，結(jié)果見表1。從表1可以看出，采用傳統(tǒng)熱溶劑回流提取，總黃酮得率較低，浪費(fèi)溶劑，耗時(shí)也較長。

　　2.2黃酮提取物的顏色反應(yīng)

　　蒼耳莖粗黃酮提取液和粗黃酮粉的乙醇配制溶液的鹽酸-鎂粉反應(yīng)均呈現(xiàn)紅色，與蘆丁顏色反應(yīng)相同，說明在該提取條件下黃酮類物質(zhì)較為穩(wěn)定。

　　2.3蒼耳莖粗黃酮粉的得率

　　由微波輔助萃取所得蒼耳莖干粉的粗黃酮粉的平均得率為11.08%，經(jīng)測定粗黃酮粉中總黃酮含量為12.01%，說明在蒼耳莖中黃酮類物質(zhì)含量較高。

　　3討論

　　蒼耳作為黑龍江省廣泛分布的野生植物資源，雖然其果實(shí)部分作為中藥目前得到重視，但儲量更大的莖葉資源還未受到重視，本研究通過微波輔助提取蒼耳莖中的具有生理活性的黃酮類物質(zhì)并測定了其含量，通過研究確定在蒼耳莖中含有較為豐富的黃酮類物質(zhì)。蒼耳這種野生植物的全株具備全面開發(fā)的潛力，對于將野生資源儲量豐富的蒼耳開發(fā)為有潛力的新型生物資源提供了參考。蒼耳莖這一潛在資源在藥品、保健品和動(dòng)物飼料等領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的開發(fā)前景。

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