生物農(nóng)藥是指利用生物活體（真菌、細(xì)菌、昆蟲病毒、轉(zhuǎn)基因生物、天敵等）或其代謝產(chǎn)物（信息素、生長素、萘乙酸鈉等）針對農(nóng)業(yè)有害生物進(jìn)行殺滅或抑制的制劑[1]。與化學(xué)農(nóng)藥相比，生物農(nóng)藥具有選擇性強(qiáng)、對作物無害、易分解、無殘留等優(yōu)點，在農(nóng)作物有害生物防治中發(fā)揮著重要作用[2]。

　　摘要：通過測定5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC、30%茶皂素AS、1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP3種生物農(nóng)藥對蜜蜂、鵪鶉、斑馬魚和家蠶的急性毒性，對其進(jìn)行環(huán)境安全評價。結(jié)果表明，5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP對蜜蜂、鵪鶉、斑馬魚和家蠶的LD50或LC50均高于檢測上限，為低毒級農(nóng)藥；30%茶皂素AS對蜜蜂、鵪鶉和斑馬魚為低毒級，對家蠶的LC50（96h）為114a.i.mg/L，為中毒級。試驗可為這3種生物農(nóng)藥的合理使用提供科學(xué)依據(jù)。

　　關(guān)鍵詞：甜菜夜蛾多角體病毒,枯草芽孢桿菌,茶皂素,非靶標(biāo)生物,毒性,環(huán)境安全評價,農(nóng)業(yè)科技論文

　　隨著人民生活水平提高和環(huán)保意識的增強(qiáng)，農(nóng)藥對環(huán)境和有益生物的影響逐漸受到關(guān)注。本研究選擇5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC、30%茶皂素AS和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP，分別代表昆蟲病毒、植物代謝產(chǎn)物和細(xì)菌3種不同類型的生物農(nóng)藥進(jìn)行相關(guān)試驗，通過測定甜菜夜蛾多角體病毒、枯草芽孢桿菌和茶皂素3種生物農(nóng)藥對蜂、鳥、魚、蠶4種非靶標(biāo)生物的毒性，為研究生物農(nóng)藥對環(huán)境的影響提供依據(jù)。

　　1材料與方法

　　1.1供試藥劑

　　5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC，武漢武大綠洲生物技術(shù)有限公司提供；30%茶皂素AS，武漢信風(fēng)作物科學(xué)有限公司提供；1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP，武漢天惠生物工程有限公司提供。試驗時用蒸餾水稀釋成所需濃度。

　　1.2供試生物

　　意大利蜜蜂（ApismelliferaL.）由武漢市蔬菜科學(xué)研究所提供，成年工蜂，健康，蜂齡一致；鵪鶉（Coturnixjaponica）由武漢市新洲汪集鵪鶉養(yǎng)殖場提供，30日齡，體重90～100g，健康，活潑，雌雄各半；斑馬魚（Brachydaniorerio）由中國科學(xué)院水生生物研究所提供，體長1.5～3.0cm，體重0.2～0.4g，健康無病，試驗前在室內(nèi)馴養(yǎng)7d，死亡率小于5%；家蠶（Bombyxmori）由西南大學(xué)提供，品種為兩廣2號，2齡起蠶。

　　1.3試驗方法

　　1.3.13種生物農(nóng)藥對蜜蜂的毒性測定

　　1）急性接觸毒性測定。以蒸餾水為溶劑，將5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC、30%茶皂素AS和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP配制成不同濃度的藥液，將貯蜂籠內(nèi)的蜜蜂引入500mL三角瓶內(nèi)，用紗布封口，通入N2氣體將蜜蜂麻醉后置于濾紙上，用微量移液器分別將配好的系列濃度藥液點滴于蜜蜂前胸背板處，點滴量為1μL/只，待蜂身晾干后轉(zhuǎn)入試驗籠中，用脫脂棉浸泡適量蔗糖水正常條件下飼養(yǎng)。以清水點滴為空白對照，記錄中毒癥狀及24、48h的死亡數(shù)[3]。

　　2）急性經(jīng)口毒性測定。將貯蜂籠內(nèi)的蜜蜂引入試驗籠中，每籠20只。不同濃度藥液與蜂蜜以2∶1（體積比）混勻，制成藥餌，裝入10mL小燒杯中，杯內(nèi)浸漬0.3g脫脂棉，杯口向下倒置于試驗籠紗網(wǎng)上，通過網(wǎng)眼供蜜蜂攝食。以清水與蜂蜜2∶1（體積比）混勻飼喂為對照，記錄24、48h死亡數(shù)[3]。

　　1.3.23種生物農(nóng)藥對鳥類的毒性測定鵪鶉試驗前24h停止喂食，僅供清水。試驗采用經(jīng)口灌注法，用灌胃器一次性給藥1.0mL/100g體重，以清水灌注為空白對照。然后以正常條件飼養(yǎng)，觀察記錄鵪鶉的中毒癥狀和死亡率[4]。

　　1.3.33種生物農(nóng)藥對魚類的毒性測定試驗用水為經(jīng)存放曝氣處理24h以上的自來水，加入生物農(nóng)藥，測定溶解氧和pH確定適合斑馬魚生存。試驗采用半靜態(tài)法，每24h換水1次，觀察魚中毒癥狀，及時清除死魚，以不加藥相同水源為對照，記錄24、48、72、96h的死亡數(shù)[5]。

　　1.3.43種生物農(nóng)藥對家蠶的毒性測定試驗采用浸葉法，用不同濃度的藥液浸漬桑葉10s后晾干加入供試蠶。以浸漬清水的桑葉飼喂為對照，記錄24、48、72、96h的家蠶中毒癥狀及死亡情況[6]。

　　1.4數(shù)據(jù)處理

　　運用統(tǒng)計軟件DPS3.01輔助進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計算毒力回歸方程、致死中劑量（LD50）或致死中濃度（LC50）、95%置信限。

　　2結(jié)果與分析

　　2.13種農(nóng)藥對蜜蜂的毒性

　　急性接觸毒性試驗結(jié)果（表1）表明，用5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC、1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP和30%茶皂素AS在試驗濃度范圍內(nèi)點滴蜜蜂，48h內(nèi)蜜蜂無明顯中毒癥狀，3種農(nóng)藥的LD50（24h）和LD50（48h）均高于100a.i.μg/只，依據(jù)中華人民共和國環(huán)境保護(hù)部發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》，確定5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC、1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP和30%茶皂素AS對蜜蜂的觸殺毒性為低毒。

　　急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果（表2）表明，供試蜜蜂在試驗濃度范圍內(nèi)，48h無明顯中毒癥狀，3種農(nóng)藥對蜜蜂的LC50均高于2000a.i.mg/L，根據(jù)中華人民共和國環(huán)境保護(hù)部發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》，確定3種農(nóng)藥對蜜蜂的胃毒毒性為低毒。

　　2.23種農(nóng)藥對鳥的毒性

　　試驗鵪鶉經(jīng)口注入3種農(nóng)藥后，對照組的鵪鶉和低濃度組的鵪鶉無明顯中毒癥狀；高濃度組個別鵪鶉有聚堆、臥伏及呼吸急促現(xiàn)象，但能在8～10h恢復(fù)正常，無一死亡。3種農(nóng)藥對鵪鶉的LD50均高于1000a.i.mg/kg體重（表3），根據(jù)中華人民共和國環(huán)境保護(hù)部發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》，確定3種農(nóng)藥對鳥類屬于低毒級農(nóng)藥。2.33種農(nóng)藥對魚的毒性

　　斑馬魚接觸甜菜夜蛾多角體病毒和枯草芽孢桿菌試液后，無明顯中毒癥狀，全部試驗的斑馬魚均無死亡，LC50均大于100a.i.mg/L；斑馬魚接觸茶皂素試液后，在較高濃度組中，表現(xiàn)出行動遲緩、側(cè)翻沉底和浮于水面等中毒癥狀，并有死亡，茶皂素對斑馬魚的LC50（96h）為29a.i.mg/L（表4）。根據(jù)中華人民共和國環(huán)境保護(hù)部發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》，大于10a.i.mg/L為低毒，由此確定5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC、30%茶皂素AS和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP對魚類的急性毒性為低毒。

　　2.43種農(nóng)藥對家蠶的毒性

　　觀察結(jié)果表明，家蠶飼喂30%茶皂素AS處理后的藥葉，高濃度組家蠶出現(xiàn)拒食、足突出、蠶體綿軟發(fā)白等現(xiàn)象，多數(shù)家蠶挺直靜臥，直至死亡。根據(jù)不同濃度組家蠶的死亡率，計算得出30%茶皂素AS對家蠶的LC50（96h）為114a.i.mg/L；當(dāng)染毒濃度為2000a.i.mg/L時，5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP處理家蠶在96h內(nèi)無死亡和中毒癥狀，確定2種農(nóng)藥劑型對家蠶急性毒性LC50（96h）大于2000a.i.mg/L（表5）。根據(jù)中華人民共和國環(huán)境保護(hù)部發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》確定30%茶皂素AS對家蠶為中毒級，5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP對家蠶為低毒級農(nóng)藥。

　　3小結(jié)與討論

　　本研究結(jié)果表明，5億PIB/g甜菜夜蛾多角體病毒SC和1×1011個/g枯草芽孢桿菌WP對蜜蜂、鳥類、魚類和家蠶為低毒級農(nóng)藥，對環(huán)境較為友好；30%茶皂素AS對蜜蜂、鳥類和魚類為低毒級農(nóng)藥，對家蠶毒力表現(xiàn)為中毒，因此在田間使用時應(yīng)盡量遠(yuǎn)離桑園，勿在桑園的上風(fēng)向使用，防止因藥霧飄散、沉降至桑葉上而影響家蠶養(yǎng)殖。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]華乃震，華純.生物殺蟲劑的進(jìn)展和應(yīng)用[J].農(nóng)藥，2011（7）：469-473.

　　[2]劉淑娟.生物農(nóng)藥與生態(tài)環(huán)境保護(hù)[J].泰安師專學(xué)報，2002，24（6）：74-75.

　　[3]吳聲敢，王強(qiáng)，趙學(xué)平，等.毒死蜱和甲氰菊酯對蜜蜂毒性與安全評價研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2004（1）：14-16，21.

　　[4]楊佩芝，蔣新明，蔡道基.化學(xué)農(nóng)藥對禽鳥的毒性與評價[J].農(nóng)村生態(tài)環(huán)境，1986（3）：8-11，37.

　　[5]蔡道基，汪競立，楊佩芝，等.農(nóng)藥對魚類的毒性與評價的初步研究[J].農(nóng)村生態(tài)環(huán)境，1987（2）：7-11.

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