偽狂犬病是由偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)引起的多種動(dòng)物共患傳染病,以發(fā)熱、奇癢(豬除外)及腦脊髓炎為主要癥狀[1]。豬感染偽狂犬病毒后主要表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙[2],哺乳仔豬尖叫、腹瀉和轉(zhuǎn)圈、大量發(fā)病死亡,保育豬神經(jīng)癥狀,育肥豬呼吸道癥狀、生長發(fā)育緩慢。豬偽狂犬病對(duì)養(yǎng)豬生產(chǎn)的影響很大,給中國的養(yǎng)豬業(yè)特別是集約化養(yǎng)豬造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。
摘要:在種豬群偽狂犬病野毒(gE)抗體監(jiān)測的第一階段,進(jìn)行了不同檢測單位的比對(duì)試驗(yàn)。對(duì)來自71個(gè)個(gè)體間隔1周的兩次血清樣本進(jìn)行檢測,2個(gè)檢測機(jī)構(gòu)之間的gE抗體陽性符合率分別為35.71%、45.45%,總體檢測符合率分別為87.32%、91.55%;2個(gè)檢測機(jī)構(gòu)各自的gE抗體陽性符合率分別為40.00%、75.00%,總體檢測符合率分別為87.32%、97.18%。表明在豬群進(jìn)行偽狂犬病野毒感染鑒定的初期,有必要對(duì)檢測單位進(jìn)行篩選。
關(guān)鍵詞:偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),野毒抗體,對(duì)比試驗(yàn)
國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系疫病控制研究室“十二五”重點(diǎn)任務(wù)“偽狂犬病、豬瘟凈化與藍(lán)耳病綜合防控”中要求,在偽狂犬病凈化任務(wù)結(jié)束時(shí),參與試驗(yàn)的種豬場(或生產(chǎn)線)應(yīng)全部為野毒gpI(gE)抗體陰性。根除和凈化措施分為普查、強(qiáng)化免疫控制、檢測淘汰、全群清群與引種、監(jiān)測認(rèn)證與維持等5個(gè)階段,在實(shí)施過程中,檢測結(jié)果將影響凈化的具體方案和實(shí)施細(xì)節(jié)。本研究在種豬群偽狂犬病野毒感染狀況監(jiān)測的第一階段,進(jìn)行了豬偽狂犬病野毒抗體不同檢測單位檢測結(jié)果的比對(duì)試驗(yàn),現(xiàn)將試驗(yàn)情況及建議報(bào)告如下,以供養(yǎng)豬生產(chǎn)中豬群偽狂犬病等疾病檢測、凈化時(shí)參考。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)動(dòng)物與試劑
試驗(yàn)豬為湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)原種豬育種場基礎(chǔ)母豬520頭,種公豬19頭,自繁自養(yǎng)。gE基因缺失弱毒疫苗(K-61株自然缺失基因苗),德國柏林格茵格翰公司。后備豬在70日齡和配種前各免疫1次,種母豬每年普免3次,普免時(shí)避免在分娩前7d內(nèi)接種,以減少接種應(yīng)激對(duì)分娩的影響,并在母豬分娩后補(bǔ)免;公豬采用集中普免的方式,每年免疫3次。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1血樣采集用保定器套住種豬上顎,用20mL一次性注射器前腔靜脈采血。母豬按群體數(shù)量10%的比例進(jìn)行采樣,種公豬進(jìn)行全群采樣。
1.2.2樣品制備取編好號(hào)的血樣離心管放入離心機(jī),4000r/min離心2~5min,將上層血清用吸管慢慢吸出,每個(gè)樣品分別放入2支離心管,加蓋編號(hào)登記,全部樣品隨機(jī)分為2個(gè)平行組。
1.2.3樣品送檢將2組平行樣品分別送至具備檢測與分析條件的2家專業(yè)檢測機(jī)構(gòu)(以下分別簡稱甲單位、乙單位),獨(dú)立檢測樣品中偽狂犬病野毒感染情況。
1.2.4檢測方法采用偽狂犬病野毒抗體檢測試劑盒(gE-ELISA試劑盒,IDEXX公司)進(jìn)行檢測。
1.2.5偽狂犬病gE抗體判定標(biāo)準(zhǔn)S/N≤0.60,判定為陽性;0.600.70,判定為陰性。
2結(jié)果與分析
由表1可知,甲單位gE抗體陽性豬為12頭,陽性率為16.90%(12/71),乙單位gE抗體陽性豬為7頭,陽性率為9.86%(7/71),兩單位的共同陽性豬為5頭,陽性符合率為35.71%(5/14)。兩單位的共同非陽性豬為57頭,共同陽性豬為5頭,總體符合率為87.32%(62/71)。
由表2可知,甲單位gE抗體陽性豬為9頭,陽性率為12.68%(9/71),乙單位gE抗體陽性豬為7頭,陽性率為9.86%(7/71),兩單位的共同陽性豬為5頭,陽性符合率為45.45%(5/11)。兩單位的共同非陽性豬為60頭,共同陽性豬為5頭,總體符合率為91.55%(65/71)。
由表3和表4可知,甲單位兩次gE抗體檢測中共同陽性豬為6頭,共同非陽性豬為56頭,兩次檢測陽性符合率為40.00%(6/15),總體符合率為87.32%(62/71)。乙單位兩次gE抗體檢測中共同陽性豬為6頭,共同非陽性豬為63頭,兩次檢測陽性符合率為75.00%(6/8),總體符合率為97.18%(69/71)。
3小結(jié)與討論
1)用具有糖蛋白gE基因缺失背景的疫苗進(jìn)行豬偽狂犬病免疫,用gE-ELISA試劑盒能區(qū)分疫苗接種豬和野毒感染豬,且敏感性很高[4]。2個(gè)檢測機(jī)構(gòu)之間,兩次檢出gE抗體陽性樣本的共同符合率分別為35.71%、45.45%,顯示PRVgE抗體S/N值存在著偏差,但兩單位兩次檢測的總體符合率分別為87.32%和91.55%,說明對(duì)群體野毒感染陽性個(gè)體還是能夠確定檢出的。本試驗(yàn)結(jié)果說明,為得到豬群偽狂犬病野毒感染較確定的檢測結(jié)論,檢測樣本量不能低于10頭。
2)偽狂犬病的根除是通過使用基因標(biāo)志疫苗與相應(yīng)的鑒別診斷來進(jìn)行的,通過逐步隔離和淘汰自然感染豬,建立和擴(kuò)大健康豬群,從而達(dá)到根除偽狂犬病的目的。兩個(gè)檢測機(jī)構(gòu)兩次檢測gE抗體陽性結(jié)果各自的符合率分別為40.00%、75.00%,各自的總體檢測符合率分別為87.32%、97.18%。在進(jìn)行豬群偽狂犬病野毒感染鑒定時(shí),有必要進(jìn)行檢測單位的篩選;同時(shí),對(duì)可疑豬有必要進(jìn)行重復(fù)檢測加以確認(rèn)。
3)本試驗(yàn)受檢豬群健康狀況相對(duì)良好,豬偽狂犬病野毒感染檢出率為9.86%~16.90%,且檢測出偽狂犬病野毒感染陽性的豬只相對(duì)集中于2010年留種群,表明此階段留種群在疫苗的制備、運(yùn)輸以及免疫注射等操作過程中存在著操作失誤的可能。因此,也證明合理的免疫程序和規(guī)范的免疫操作可有效地阻止豬偽狂犬病野毒感染,有必要將該病納入常規(guī)免疫程序?qū)ωi群進(jìn)行免疫保護(hù)。
參考文獻(xiàn):
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