金線蓮又名金線蘭、金絲草，為蘭科開唇蘭屬多年生名貴中藥材，具有清熱涼血、除濕解毒等功效，用于治療糖尿病、腎炎、急慢性肝炎等癥，在民間享有“藥王”的美稱[1-2]。由于金線蓮自然繁殖率低，對生態(tài)環(huán)境要求嚴格，適應(yīng)性較差，加之人工過度采挖，使得野生資源銳減。

　　[摘要]采用甲醇提取，液液分配凈化，高效液相色譜分析多菌靈在金線蓮根、莖、葉及栽培基質(zhì)中的殘留消解動態(tài)，并對其安全使用標準進行討論。結(jié)果表明不同多菌靈添加濃度下的回收率為82.9%～95.7%，RSD為2.0%～6.3%，滿足農(nóng)藥殘留檢測要求。田間試驗分別采用推薦劑量（1.0kg・hm-2）和1.5倍推薦劑量（1.5kg・hm-2）進行處理，2年連續(xù)實驗結(jié)果表明，多菌靈在金線蓮栽培基質(zhì)中的半衰期為7.01～8.51d，在根中殘留趨勢為先升后降，半衰期為4.93～5.71d，在莖和葉中的消解半衰期分別為3.58～4.27，3.50～3.91d。若多菌靈在金線蓮植株中的最高殘留限量推薦值為0.5mg・kg-1，每年以1.0kg・hm-2的劑量噴施4次，最后一次施藥和收獲時間的安全間隔期可推薦為28d。

　　[關(guān)鍵詞]農(nóng)業(yè)論文投稿,金線蓮,多菌靈,消解動態(tài),安全間隔期

　　近年來許多學(xué)者對金線蓮人工栽培進行研究，在種苗培育、組培苗移栽、設(shè)施栽培等關(guān)鍵技術(shù)取得突破性進展[3-5]。金線蓮種植期間，莖腐病和軟腐病危害嚴重，種植者常采用多菌靈進行病害防治。多菌靈是一種廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，但殘效期較長，并且對動植物及人體有一定的危害，目前已有研究表明，多菌靈能夠影響哺乳動物精母細胞的減數(shù)分裂[6]。目前已有關(guān)于多菌靈在大青葉、白術(shù)、人參以及浙麥冬等中藥材降解殘留動態(tài)的相關(guān)報道[7-10]，但多菌靈在金線蓮上的殘留動態(tài)還未見報道。本文研究多菌靈在金線蓮根、莖、葉及栽培基質(zhì)中的殘留消解動態(tài)，并對其安全使用標準進行討論，為多菌靈的合理使用及其生態(tài)安全性評價提供科學(xué)依據(jù)。

　　1材料與方法

　　1.1田間試驗

　　本試驗于2012年4―8月，2013年4―8月在浙江農(nóng)林大學(xué)百草園和浙江文成黃坦鎮(zhèn)進行。供試材料為金線蓮Anoectochilusroxburghii，由浙江農(nóng)林大學(xué)胡潤淮教授鑒定。設(shè)施藥劑量為1.0kg・hm-2（推薦劑量）和1.5kg・hm-2（1.5倍劑量）2個處理，50%多菌靈可濕性粉劑兌水后，用背負式手動噴霧器均勻噴灑。每個處理3次重復(fù)，每小區(qū)30m2。結(jié)合金線蓮生產(chǎn)實際，各處理小區(qū)實行四輪施藥，第1輪以推薦劑量于移栽后10d噴施，第2輪和第3輪分別于5月初和6月初以推薦劑量和1.5倍推薦劑量噴施，第4次施藥距離收獲大約30d，以推薦劑量和1.5倍推薦劑量分別施藥，按照《農(nóng)藥殘留試驗準則》于2h，1，3，7，10，14，21，30d進行采樣和樣品處理[11]。

　　1.2儀器與試劑

　　高效液相色譜儀（Waters600），KQ-300超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），高速勻漿機（天津市泰斯特儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R-201），電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DGG-9070A）等。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，50%多菌靈可濕性粉劑（四川國光農(nóng)化有限公司），多菌靈對照品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所提供，純度>99%），助濾劑545（硅藻土載體，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

　　1.3色譜條件

　　Waters600高效液相色譜儀（Waters2998PAD），C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）。流動相為甲醇-水55∶45；流速1.0mL・min-1，柱溫25℃，波長281nm，進樣量20μL。

　　1.4標準溶液的制備

　　以甲醇為溶劑，將已配制的質(zhì)量濃度為100mg・L-1的多菌靈母液分別稀釋成60，20，5，1，0.5，0.05mg・L-1的一系列標準工作溶液，采用高效液相色譜法測定，以外標法定量。

　　1.5樣品的制備

　　1.5.1栽培基質(zhì)參照魏厚道等[10]方法，稱取金線蓮栽培基質(zhì)樣品20g，置于250mL錐形瓶中，加入約1.0g助濾劑、100mL甲醇和0.2mol・L-1的鹽酸10mL，超聲提取1.5h，抽濾，用50mL甲醇洗滌殘渣，合并濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至20mL左右，加入0.2mol・L-1的鹽酸10，40mL水，混勻，再加40mL石油醚，震蕩1min，靜置，棄去有機相，水相用1mol・L-1的氫氧化鈉調(diào)pH至7.0，再依次用40，30，20mL二氯甲烷萃取，經(jīng)無水硫酸鈉脫水，合并濾液，加1mL乙酸乙酯減壓濃縮至近干，改用氮氣吹干，甲醇定容至5mL，待HPLC檢測。

　　1.5.2金線蓮新鮮根、莖和葉參照魏厚道等[10]方法，分別稱取金線蓮新鮮根、莖、葉樣品各5.0g，置于250mL錐形瓶中，加入100mL甲醇，在勻漿機中高速勻漿1min，加入約1.0g助濾劑，超聲提取1.0h，抽濾，用50mL甲醇洗殘渣，合并濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮約至10mL左右，加入30mL10%的氯化鈉溶液和1mol・L-1的鹽酸溶液10mL，搖勻后再加入40mL二氯甲烷萃取至褪色，有機層用20mL10%的氯化鈉溶液和1mol・L-1的鹽酸溶液5mL反萃取1次，棄去有機相，酸液用2mol・L-1氫氧化鈉調(diào)pH至6.5～7.0，再依次用40，30，20mL二氯甲烷萃取，經(jīng)無水硫酸鈉脫水干燥后合并，加1mL乙酸乙酯減壓濃縮至近干，改用氮氣吹干，甲醇定容至5mL，待HPLC檢測。2結(jié)果與分析

　　2.1方法的靈敏度、準確度及精確度

　　以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作多菌靈標準工作曲線，其標準曲線方程為Y=0.0072X+0.0058，R2=0.9999。該結(jié)果表明，質(zhì)量濃度在0.05～60mg・L-1，多菌靈含量與峰面積有良好的線性關(guān)系。在空白根、莖、葉以及栽培基質(zhì)中分別添加0.05，0.50，5.00mg・L-1的多菌靈對照品，每個濃度做3次重復(fù)試驗，按照1.5的方法處理后測定添加回收率，見表1。其平均回收率為82.9%～95.7%，RSD均低于6.3%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

　　2.2多菌靈消解動態(tài)

　　2.2.1多菌靈在金線蓮栽培基質(zhì)中的消解動態(tài)多菌靈在金線蓮基質(zhì)中的消解動態(tài)呈一級動力學(xué)特征，消解動力學(xué)參數(shù)見表2。2012年的半衰期分別為8.51d（推薦劑量）和7.01d（1.5倍劑量），而2013年的半衰期分別為7.81d（推薦劑量）和7.33d（1.5倍劑量），見圖1。試驗結(jié)果表明，栽培基質(zhì)中高濃度處理多菌靈消解速度快于低濃度處理。這與林建等[8]多菌靈在白術(shù)土壤中的消解動態(tài)以及魏厚道等[10]多菌靈在浙麥冬土壤中的消解動態(tài)研究結(jié)果相類似。這可能與栽培基質(zhì)中微生物利用并降解農(nóng)藥的特點有關(guān)，微生物在殘留農(nóng)藥濃度較低的情況下，趨于利用其他碳源有機物，對農(nóng)藥的利用效率較低，這可能是導(dǎo)致低濃度處理多菌靈消解速率比較慢的原因。

　　2.2.2多菌靈在金線蓮根中的降解動態(tài)施藥初期根中多菌靈濃度接近于0，而在施藥后3d后達到最大值，隨后快速消解，并在距最后一次施藥30d左右后殘留量降至檢測水平以下。此外，多菌靈在根部達到最高濃度后的半衰期分別為5.19d（推薦劑量，2012年），5.71d（1.5倍劑量，2012年），4.93d（推薦劑量，2013年），5.24d（1.5倍劑量，2013年），見圖2。施藥后多菌靈需通過莖葉的運輸傳導(dǎo)及栽培基質(zhì)吸收才能到達根部，所以達到最大值之前需要一段時間過程。但隨著農(nóng)藥經(jīng)莖葉運輸傳導(dǎo)作用的減弱和栽培基質(zhì)吸收量的減少，以及農(nóng)藥降解速度的增加，使得根部的多菌靈殘留迅速減少。在持續(xù)2年的試驗中發(fā)現(xiàn)，低濃度處理金線蓮根中多菌靈降解速度快于高濃度處理，且2013年的降解速度快于2012年。這可能與2013年浙江省夏季天氣炎熱、干旱少雨，栽培基地每天清晨和傍晚都要進行澆灌有關(guān)，灌溉用水的沖刷會使得植株和栽培基質(zhì)中的農(nóng)藥流失速度加快，從而通過莖葉傳導(dǎo)作用以及栽培基質(zhì)吸收而獲得的對根部的補償量減少，從而導(dǎo)致多菌靈降解速度快于2012年。

　　2.2.3多菌靈在金線蓮莖中的降解動態(tài)多菌靈在金線蓮莖中的降解動態(tài)也呈一級動力學(xué)特征。2012年的半衰期分別為4.27d（推薦劑量）和4.03d（1.5倍劑量），而2013年的半衰期分別為4.11d（推薦劑量）和3.58d（1.5倍劑量），見圖3。在持續(xù)2年的試驗中發(fā)現(xiàn)，2種不同劑量的多菌靈處理2013年的降解速度快于2012年，這可能與2013年持續(xù)高溫干旱天氣，栽培基地每天清晨和傍晚都要進行澆灌有關(guān)，灌溉用水的沖刷會使得植株中的農(nóng)藥流失速度加快，從而導(dǎo)致多菌靈降解速度快于2012年。

　　2.2.4多菌靈在金線蓮葉中的降解動態(tài)多菌靈在金線蓮葉中的降解動態(tài)與在莖中的降解動態(tài)變化基本保持一致，2012年的半衰期分別為3.91d（推薦劑量）和3.74d（1.5倍劑量），而2013年的半衰期分別為3.75d（推薦劑量）和3.50d（1.5倍劑量），見圖4。比較2年試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多菌靈在金線蓮葉中的降解速度快于在莖中的降解速度。由于葉片接收灌溉用水、雨水沖刷的面積較大，使得農(nóng)藥流失速度快于莖中，因此葉中的降解速度快于在莖中。3討論

　　金線蓮根、莖、葉以及栽培基質(zhì)中多菌靈質(zhì)量濃度在0.05～5mg・L-1，平均回收率為82.9%～95.7%，RSD均低于6.3%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求，其分析方法準確可靠。在持續(xù)2年的試驗中發(fā)現(xiàn)，金線蓮根、莖、葉中2種不同劑量的多菌靈處理2013年的降解速度快于2012年，這可能與2013年浙江省夏季天氣炎熱、干旱少雨，栽培基地每天清晨和傍晚都要進行澆灌有關(guān)，灌溉用水的沖刷會使得植株中的農(nóng)藥流失速度加快，從而導(dǎo)致多菌靈降解速度快于2012年。目前，我國對中藥材中農(nóng)藥的最大殘留量（MRL）標準的研究還不多，2010年版《中國藥典》中只規(guī)定了9種有機氯農(nóng)藥、12種有機磷和3種擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的檢測方法，在限量標準方面僅規(guī)定了甘草和黃芪2種藥物的六氯環(huán)己烷（六六六）、雙對氯苯基三氯乙烷（DDT）、五氯硝基苯的限量標準，其他農(nóng)藥在中藥材中的最大殘留限量標準還未見報道[12]。我國頒布的有關(guān)多菌靈的限量指標基本上采用國際食品法典委員會（CAC）的限量標準。《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》GB2763-2012規(guī)定玉米、黃瓜、番茄以及多數(shù)水果中多菌靈MRL為0.5mg・kg-1，花生、油菜籽中多菌靈MRL為0.1mg・kg-1。臺灣《殘留農(nóng)藥安全容許量標準》規(guī)定絞股藍、菊花、洋甘菊多菌靈MRL為1.0mg・kg-1；豆菜類、瓜菜類多菌靈MRL為0.5mg・kg-1。結(jié)合GB2763-2012和臺灣《殘留農(nóng)藥安全容許量標準》建議金線蓮鮮草多菌靈MRL標準為0.5mg・kg-1，施藥劑量為1.0kg・hm-2，實行4輪施藥，最后一次施藥和收獲時間的安全間隔期為28d。施藥28d根中多菌靈殘留量為0.05～0.06mg・kg-1，莖中殘留量為0.44～0.46mg・kg-1，葉中殘留量為0.35～0.39mg・kg-1，均低于建議的限量標準。[參考文獻]

　　[1]全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編.下冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

　　[2]浙南本草新編編寫組.浙南本草新編[M].杭州：浙江人民出版社，1982.

　　[3]何春年，王春蘭，郭順星，等.蘭科開唇蘭屬植物的化學(xué)成分和藥理活性研究進展[J].中國藥學(xué)雜志，2004，39（2）：81.

　　[4]么厲，程惠珍，楊智，等.中藥材規(guī)范化種植（養(yǎng)殖）技術(shù)指南[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

　　[5]ZhangYH，CaiJY，RuanHL，etal.Antihyperglycemicactivityofkinsenoside，ahighyieldingconstituentfromAnoectochilusroxburghiiinstreptozotocindiabeticrats[J].JEthnopharmacol，2007，114（2）：141.

　　[6]AkbarshaMA，KadalmaniB，GirijaR，etal.Spermatotoxiceffectofcarbendazim[J].IndianJExpBiol，2001，39（9）：921.

　　[7]吳劍威，楊美華，陳建民，等.多菌靈在大青葉中降解殘留動態(tài)的研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（5）：267.

　　[8]林建，魏厚道，王天玉，等.白術(shù)規(guī)范化種植中農(nóng)藥多菌靈安全使用標準的研究[J].中國中藥雜志，2010，35（13）：1674.

　　[9]田金改，金紅宇，彭方，等.多菌靈在人參生長期的殘留動態(tài)研究[J].中草藥，2006，37（9）：1413.

　　[10]魏厚道，林建，王天玉，等.多菌靈在浙麥冬及其土壤中的消解動態(tài)研究[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2009，11（4）：467.

　　[11]NY/T788-2004.農(nóng)藥殘留試驗準則[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

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