西布曲明是一種中樞神經(jīng)抑制劑，可抑制去甲腎上腺素、5-羥色胺和多巴胺的再攝取，長期服用可引起血壓升高，心率加快、 厭食、肝功能異常等，重者可危及生命[1]。由于西布曲明價格低廉，屢被一些不法商家違禁加入減肥食品中，因此，建立復(fù)雜基質(zhì)中西布曲明的快速分離分析方 法具有重要意義。

　　摘要：建立了分散液液微萃取-反萃取-接受相固化與高效液相色譜聯(lián)用測定減肥茶中西布曲明的方法。優(yōu)化的條件為：400L石油醚為L甲醇為分散劑、14萃取劑、120L0.2mol/LHCl溶液和1L甲醇的混合溶液為接受相，萃取2min。在優(yōu)化條件下西布曲明的富集因子可達(dá)130倍。方法的線性范圍為0.6～200/L，檢測出限為0.2/L，定量限為0.6/L。樣品加標(biāo)回收率介于91.9%～108.4%，日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于14%。

　　關(guān)鍵詞：分散液液微萃取-反萃取-接受相固化,高效液相色譜,西布曲明

　　1引言

　　已有文獻(xiàn)報(bào)道了液液萃�。↙LE）或固相萃取（SPE）與儀器聯(lián)用[2～7]檢測血漿和保健品中的西布曲明，然而，LLE和SPE需要較大量有機(jī)溶劑、操作繁瑣耗時[8]。分散液液微萃取-上浮溶劑固化法（DLLME-SFO）是Zanjani等[9]于2007年提出來的一種新萃取技術(shù)，具有萃取時間短、有機(jī)萃取劑用量少和富集因子高等優(yōu)點(diǎn)[10～17]。但由于所用萃取劑為熔點(diǎn)接近室溫的有機(jī)溶劑，沸點(diǎn)較高，在氣相色譜分析中保留時間較長，溶劑峰會對保留時間相近組分造成干擾[10]，且由于是將有機(jī)相直接進(jìn)樣，使用HPLC進(jìn)行分析時，可選的有機(jī)相很有限，多是十一醇或十二醇[11～17]，這在一定程度上限制了該方法與HPLC分析的兼容性。

　　在DLLME-SFO的基礎(chǔ)上，本研究提出了一種基于接受相固化的分散液液微萃取-反萃取-接受相固化（DLLME-BE-SAP）新技術(shù)，通過將分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分離后將接受相冰粒室溫溶解后直接進(jìn)樣HPLC分析，有效避免了有機(jī)萃取溶劑進(jìn)樣對色譜柱的污染、擴(kuò)大了有機(jī)萃取溶劑的選擇范圍，提升了萃取方法與HPLC的兼容性。由于萃取和反萃取均采用了分散液液微萃取技術(shù)，與常規(guī)的三相液相微萃取相比，萃取時間明顯縮短，簡化了分離操作。目前，涉及接受相固化的微萃取技術(shù)尚未見報(bào)道。

　　2實(shí)驗(yàn)部分

　　2.1儀器與試劑

　　1100液相色譜儀（美國Agilent公司），由G1312A液相泵、G1316A柱溫箱、G1315二極管陣列檢測器和7725手動進(jìn)樣閥組成。超純水由Millipore公司的Milli-Q純水系統(tǒng)（Bedford，MA，美國）制得。

　　鹽酸西布曲明（中國藥品生物制品檢定所），甲醇和乙腈（色譜純），其它試劑為國產(chǎn)分析純試劑。兩種市售減肥茶（Dietictea）a和b。

　　儲備液的配制：準(zhǔn)確稱取10mg鹽酸西布曲明，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成1g/L的西布曲明儲備液。標(biāo)準(zhǔn)溶液由一定體積的儲備液稀釋制得。

　　樣品溶液的制備：減肥茶磨成粉末，稱取減肥茶A1.25g、減肥茶B1.0g各一份，分別置于2個100mL小燒杯中，用2mL沸水浸泡10min，均定容至100mL，溶液經(jīng)減壓抽濾，上清液即為樣品溶液。加標(biāo)樣品除在樣品中加入實(shí)量西布曲明外，其它步驟同上。

　　2.2色譜條件

　　3.1.3萃取時間考察了萃取時間分別為30，60，90，120和150s時對西布曲明富集因子的影響，對應(yīng)的富集因子分別為84.1，102，114.4，129.0和99.1，可見，萃取120s時，能獲得較高的富集因子。

　　3.1.4接受相組成西布曲明是叔胺化合物，實(shí)驗(yàn)選擇酸性水溶液作為接受相，通過使西布曲明質(zhì)子化實(shí)現(xiàn)反萃取。分別考察了0.1和0.2mol/L的CH3COOH，HCl，HNO3，H2SO4和H3PO4溶液作為接受相時對西布曲明富集因子的影響.結(jié)果表明，采用0.2mol/LHCl作為接受相時，西布曲明可以獲得最大的富集因子。為了縮短反萃時間，實(shí)驗(yàn)還考察了接受相加入分散劑甲醇對西布曲明富集因子的影響，考察的甲醇與HCl溶液體積比分別為1∶14，2∶13，3∶12，4∶11和5∶10，當(dāng)甲醇與HCl體積比為1∶14時，西布曲明有最大的富集因子，且接受相凝固速度快。當(dāng)甲醇與HCl的體積比大于3∶12時，接受相幾乎不能凝固，這可能是由于甲醇的熔點(diǎn)太低（98℃）所致。反萃振搖30s，反萃效率（接受相中西布曲明的物質(zhì)的量與原料液和萃取后料液中西布曲明的物質(zhì)的量差值的比值）大于97%。本實(shí)驗(yàn)選擇14

　　采用本方法對市售減肥茶a和b進(jìn)行分析。以減肥茶a為例，相關(guān)色譜圖如圖2c和2d。圖2c說明，減肥茶a中未檢出西布曲明，圖2d顯示加標(biāo)樣品中的西布曲明能夠順利被檢出。同樣，減肥茶b中也未檢出西布曲明。對減肥茶樣品進(jìn)行高、中、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)加入回收分析，西布曲明萃取后獲得的加標(biāo)回收率介于91.9%～108.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差介于5.1%～14%，說明本方法具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于減肥茶中西布曲明的分析。

　　3.3與其它方法的比較

　　將本方法與文獻(xiàn)方法進(jìn)行比較（表1）可知，本方法借助簡便的DLLME-BE-SAP對西布曲明進(jìn)行分離富集，有機(jī)萃取溶劑消耗少、萃取時間短，采用價格相對便宜的HPLC-UV進(jìn)行檢測，靈敏度高于一般的HPLC-UV和CE，甚至高于或接近部分HPLC-MS方法。

　　4結(jié)論

　　本研究建立了一種操作簡便、萃取時間短、與HPLC兼容性好的DLLME-BE-SAP樣品分離富集方法，通過將分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分離后將接受相冰粒室溫溶解后直接進(jìn)樣HPLC分析，對減肥茶中痕量違禁藥物西布曲明進(jìn)行了檢測。

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